免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，它是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。

  直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。

  如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。

  标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。

  一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括 样片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。

  对于冰冻切片制备，建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。组织一定要冷冻适度，切片时选用干净锋利的刀片，防止裂片和脱片。

  为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用封闭液（一般来说包括与二抗同一来源的血清、BSA或者羊血清）封闭，减弱背景着色。封闭开始后，要注意样品的保湿，避免样品干燥，否则极易产生较高的背景。

  一抗孵育温度大体上分为：4℃、室温、37℃，其中4℃效果更加好；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37℃孵育1-2h，4℃过夜（从冰箱拿出后37℃复温45min）。具体条件还要根据样品、稀释液等条件进行摸索尝试。

  荧光二抗孵育一般在室温或37℃孵育30min-1h，该过程必须在避光环境下进行，防止荧光淬灭。荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能会出现大量的游离荧光素残留，必须要格外注意配制时采用小包装并进行适当的离心。

  一般采用DAPI进行复染，目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。

  为了长期保存，我们应该对样本做封片，用吸水纸吸干爬片上的液体，一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。

  有条件的话最好立即用荧光显微镜观察拍照，若不能及时拍照，也要做好封片和封固，保持避光和湿度。荧光显微镜的成像能力对最终的结果也会造成非常大的影响，好的荧光显微镜能够最大限度地收集荧光信号，并呈现高分辨率的图片，使细节更清楚，更易得到一张效果极佳的结果图。

  (3)冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质；(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求（建议PH在7.4-7.6，浓度是0.01M；中性及弱碱性条件有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）。

  根据上述步骤完成免疫荧光实验后，就有必要进行荧光显微成像，得到我们想要的结果。选择一款简单易操作、成像清晰、效果卓越的荧光显微镜进行观察拍照，才能轻松得到更为理想的结果图，达到事半功倍的效果。

  Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜作为一款电动化、智能化的显微镜，具有以下优势：

  极大地降低了背景噪音和荧光干扰，提高图像锐度，加深细节，得到分辨率更高的图片；

  通过高精度电动化Z轴层扫来扩大景深，解决厚样本观察问题，提高图像分辨率；

  北京第三代半导体产业技术创新战略联盟对《碳化硅单晶生长用等静压石墨构件纯度测定 辉光放电质谱法》等2项团体标准征求意见

  3000万！石河子大学第一附属医院检验中心全自动化学发光分析、流水线及配套试剂/耗材采购

  齐鲁工业大学（山东省科学院）单价10万元以上大型仪器已有698台加入共享服务网

  1209万！首都医学科学创新中心冷冻透射电镜和天津医科大学总医院毒物检测实验室设备采购项目

  展会邀请-艾普拜生物邀请您参加2024 IVD China体外诊断创新展

  快速荧光定量PCR扩增酶预混液(UNG, 2×)让qPCR实验so easy

  多重数字PCR活菌检测：naica®数字PCR系统助力霍乱弧菌活菌绝对定量

  邀请函中国海洋湖沼学会水环境分会、中国环境科学学会海洋环境保护专业委员会2023年学术年会

  创新引领 YOUNG帆起航——仪器信息网25周年 我们不一YOUNG！

  naica®微滴芯片数字PCR系统量化造血干细胞移植儿童巨细胞病毒感染的病毒载量

  naica®微滴芯片数字PCR系统对韩牛分子标记物的准确评估助力种质鉴定

  文献速递 naica®微滴芯片数字PCR系统助力肺炎克雷伯菌的高灵敏检测

  邀请函 第二十二届中国生物制品年会（CBioPC），与您相约，不见不散

  naica®微滴芯片数字PCR系统精准量化Dravet综合征Scn1a无义突变模型中R613X的转录